人生就是博-尊龙凯时的低温运输产品系列中，CAT#:15-45000可在-20℃下保存，为研究者提供了高质量的蛙病毒探针法荧光定量PCR试剂盒（Ranavirus qPCR Kit）。本使用手册版本为V10，详细介绍了本产品的特性及应用。

产品特点

蛙病毒（Ranavirus）具备在多种培养细胞上生长的能力，并对宿主细胞的大分子合成具有抑制作用。其增殖过程与痘病毒相似，但需依赖于宿主细胞的细胞浆和细胞核。因为蛙病毒能够感染多种昆虫并影响其幼虫，所以进行快速且准确的病毒检测至关重要，以便于疾病的预防和检疫。为满足这一需求，人生就是博-尊龙凯时开发了简便高效的蛙病毒荧光定量PCR检测试剂盒。该试剂盒有以下几大优点：

• 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
• 引物和探针经优化，灵敏度高。
• 提供阳性对照，便于识别假阴性样品。
• 特异性高，引物设计基于蛙病毒的高度保守区，因此不与其他微生物DNA交叉反应。
• 可进行定性和定量检测，定量范围至少涵盖5个数量级。
• 本产品可支持50次20μL的探针法荧光定量PCR反应。
• 适用于科研用途。

成分及储存

本试剂盒包含以下成分：

• 5孔包装
• 2×Probe qPCR Magic Mix：500μL（编号：190303）
• 荧光PCR专用模板稀释液：1ml（编号：180701）
• 纯净水：1ml（编号：100935）
• 蛙病毒探针法qPCR引物-探针混合液：150μL（编号：15-45000yp）
• 蛙病毒探针法qPCR阳性对照（1×10E7拷贝/μL）：50μL（编号：45000pc）
• 使用手册：1份（编号：15-96308）

该产品需低温运输，保存条件为-20℃，保质期为12个月。用户需自备样品DNA。

操作流程

一、稀释标准曲线样品

在处理标准品时，需在独立区域进行，以免污染样品或其他试剂盒成分。由于本试剂盒不提供活体阳性对照，因此使用无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，编号为6、5、4、3、2、1。
2. 使用带芯枪头，向每个管中添加45μL荧光PCR专用模板稀释液。
3. 在6号管中加入5μL的阳性对照，混匀后得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。
4. 按此操作逐渐稀释到1×10E1拷贝/μL，得到所有稀释梯度的样品。

二、样品DNA的制备

进行样品DNA提取时，建议设置N+2个提取，以便包括阳性对照和阴性对照。可使用可靠的方法进行样品DNA的纯化，确保与市场上大部分DNA提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR反应

在样品制备室进行20μL的Probe qPCR反应，确保样品管和对照管设置完毕，方可进行PCR操作，并输入适当配方。

四、数据处理

若用于定量检测，则使用阳性对照浓度的对数值绘制标准曲线；而用于定性检测，需确保阴性对照的Ct值大于等于40。阳性对照则应表现出典型的扩增曲线，且Ct值小于等于36。若待测样品的Ct值在36到40之间需复测。

人生就是博-尊龙凯时的蛙病毒荧光定量PCR试剂盒不仅保证了操作的简便性与精准性，更为相关领域提供了强有力的技术支持。